辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒

测定原理：

根据Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。

需自备的仪器及用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体100mL ×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入6mL蒸馏水充分混匀待用；

试剂三：液体2mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。用时加入3mL双蒸水， 4℃保存。

试剂五：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。

试剂六：粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。

试剂七：液体25mL×1 瓶，室温保存。

试剂八：10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂八 20倍稀释，即取0.1mL试剂八加1.9mL蒸馏水充分混匀。

定磷剂的配制：按H2O: 试剂五:试剂六:试剂七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

样品酶液的制备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

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