大鼠ATP酶 (ELISA)试剂盒 |
大鼠ATP酶 (ELISA)试剂盒 |
实验条件的选择
在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
进口包装:
检测范围和灵敏度不同。用量少时,可采用分装。在早期,它的耐用性不是很好。
试剂盒标准曲线最高点OD值为2.0±0.2,零孔OD值控制在0.10以下。
试剂盒标准曲线相关系数R≥0.98。
试剂盒重现性好,板内及板间变异系数<9%。
试剂的成分均给予20%的余量,以确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能出现试剂不足的情况。
检测抗体和酶联物的稀释度适当(均为1:30),方便检测人员准确进行稀释工作,保证检测结果的重复性。
Interleukin-6 是一种细胞因子,已被鉴定为 B 细胞分化因子。它是一种抗体形成系统,其生理特性,如诱导肝细胞中的急性蛋白质合成和基于与白细胞介素3协同作用的生长刺激,也备受关注。并且已经证实白细胞介素6与病理学之间存在稳定的相关性。例如,有报道称各种疾病的生长因子是白介素6,骨髓瘤细胞可以合成白介素6并表达白介素6受体。此外,白细胞介素6在多种炎症性疾病和自身免疫性疾病中发挥重要作用。本试剂盒可高灵敏度检测小鼠血清和细胞基质上清液中的白细胞介素6。原理 本试剂盒使用两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物溶液显色,显色强度与小鼠体内IL-6量成正比。检测范围 10.94 700 pg/mL 预期用途
自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
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