大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽 （ELISA）试剂盒

主要设备

试剂

(1) 包被缓冲液（pH9.60.05M 碳酸盐缓冲液）：

Na2CO3 1.59g

碳酸氢钠 2.93g

加入蒸馏水至 1000ml

（2）洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M

K2PO4 0.2g

Na2HPO4 12H2O 2.9g

氯化钠 8.0g 0.2g

Tween-20 0.05% 0.5ml

加入蒸馏水至 1000ml

(3) 稀释剂：

牛血清白蛋白 (BSA) 0.1 克

加入洗涤缓冲液至 100ml

或用山羊血清、兔血清等血清和洗涤液补足5-10%。

(4) 终止液（3M H2SO4）：

滴加蒸馏水178.3ml、浓硫酸（98%）21.7ml。

(5)底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸)：

0.2MNa2HPO4 (28.4g/L) 25.7ml

0.1M柠檬酸（19.2g/L）24.3ml

加入 50ml 蒸馏水。

(6)TMB(四甲基联苯胺)溶液：

TMB（10mg/5ml 无水乙醇）0.5ml

底物缓冲液 (PH5.5) 10ml

0.7%H2O2 32μl

(7 ABTS使用液：

ABTS 0.5mg

底物缓冲液 (PH5.5) 1ml

3%H2O2 2μl

(8)抗原、抗体和酶标抗体。

(9)正常人血清和阳性对照血清。

利用

ELISA的基础是抗原或抗体的固定化和抗原或抗体的酶标记。固相载体表面结合的抗原或抗体仍保留其免疫活性，而酶标抗原或抗体同时保留其免疫活性和酶活性。在测量过程中，测试样品（其中的抗体或抗原）与固体支持物表面的抗原或抗体发生反应。在固相载体上形成的抗原抗体复合物通过洗涤与液体中的其他物质分离。然后加入酶标抗原或抗体，也通过反应与固相载体结合。此时，固相上酶的量与样品中被测物质的量成正比。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成有色产物，产物的多少与样品中被测物质的多少直接相关，因此可以进行定性或定量分析根据颜色深度。由于酶的高催化效率，间接放大了免疫反应的结果，并且该测定方法达到了高灵敏度。 ELISA 可用于测量抗原和抗体。

组成结构

1. 血清：手术过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。采血后，通过以 1000 x g 离心 10 分钟快速小心地分离红细胞。

2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。通过以 1000 x g 离心 30 分钟去除颗粒。

3. 细胞上清液：1000×g 离心 10 分钟以去除颗粒和聚集物。

4、组织匀浆：加入适量生理盐水捣碎组织。 1000 × g 离心 10 分钟，取上清液。

5、储存：样品如不立即使用，应分成小份储存于-70℃，避免反复冷冻。尽量不要使用溶血或高脂血症。如果血清中含有大量颗粒，请在测试前将其离心或过滤。不要在 37°C 或更高的温度下解冻。在室温下解冻并确保样品均匀、充分地解冻。

该IBL试剂盒可用于小鼠血清、EDTA血浆和细胞上清液中白细胞介素6的定量检测

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