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人白细胞介素21 (ELISA)试剂盒 |
注意事项 ELISA试剂盒检测过程中的注意事项 一、ELISA实验通用规则 1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。 2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。 3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。 4、实验时,要使底物避光保存。 5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。 6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。 7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。 8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。 9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。 10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加*。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。 11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。 12、底物是光敏感的,要在临用前现配。 13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。 14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。 15、待检样品要澄清,否则会影响结果。 16、温浴时间应遵守试剂盒规定。 17、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。 18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。 |
人白细胞介素21受体 (ELISA)试剂盒 |
二、下面所提到的是针对我公司的ELISA产品会出现的问题及解决办法 1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。 a.原因:未加入酶标记物。 解决办法:请按照操作步骤进行。 b.原因:试剂盒内容物未能充分回。 解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。 c.原因:室温太低。 解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。 d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。 解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。 e.原因:试剂盒已过有效期限。 解决办法:请更换成仍在有效期限内的试剂盒。 2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。 a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。 解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。 b.原因:操作时间拖太久。 解决办法:请在方法熟练后再进行操作。 c.原因:微孔间相互污染。 解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。 d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。 解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。 e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。 解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。 f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。 解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。 3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。 a.原因:室温太高(>25℃)。 解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。 b.原因:底物溶液受到污染。 解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。 c.原因:反应时间超过太久。 解决办法:请控制反应时间。 d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。 解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留) 4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。 a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。 解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。 b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。 解决办法:请参考2-f. c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。 解决办法: 请参考2-d. |
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