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人白细胞介素21 (ELISA)试剂盒 |
实验条件的选择 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括: (1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。 (2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。 (3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 (4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。 |
人白细胞介素21 (ELISA)试剂盒 |
注意事项 ELISA试剂盒检测过程中的注意事项 一、ELISA实验通用规则 1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。 2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。 3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。 4、实验时,要使底物避光保存。 5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。 6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。 7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。 8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。 9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。 10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加*。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。 11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。 12、底物是光敏感的,要在临用前现配。 13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。 14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。 15、待检样品要澄清,否则会影响结果。 16、温浴时间应遵守试剂盒规定。 17、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。 18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。 |
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