ELISA试剂盒操作步骤知多少？

发布时间： 2023-06-29　　点击次数： 1029次

　　操作步骤

　　（一）样品准备

　　1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

　　2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

　　3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

　　（二）检验方法

　　1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

　　2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

　　3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

　　4.混匀，置37℃反应30分钟。

　　5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

　　6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

　　7.洗涤，同步骤5。

　　8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

　　9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。